Genetik Selektieren, Monokultur, rizhomorphes Mycel, Klonen,

[Waaagh]

Na dann hast du doch schonmal ein paar Fehlerquoten ausgeschlossen...
Wenn du weißt das es nicht an den Petris liegt, und der Rest steril bleibt.

Ich tippe wie Hogie auf Hefe, solltest du auch riechen^^

Lass beim nächsten mal arbeiten ne Petri in der Glovebox offen stehen, dann kannst du schonmal die Glovebox checken.

Du beimpfst mit altem Mycel aus Petris neue ?
Kontaminiert die alte Petri denn auch , von der du das Mycel nimmst?

[Knospe]

jo stinkt widerlich, wird schon hefe sein. die alte kontaminiert dann auch meistens. ich geh mal davon aus dass es bakterien sind, ganz viele kleine gelbe punkte nur am rand sind das.

e.: wobei ich die letzten schalen mit sporen beimpft habe.

das mit der offenen petri is ne gute idee, wird gemacht! wielange sollte die denn offen stehen?

außerdem benutz ich jetzt mal nen - vorher im ddkt sterilisierten - schaschlikspieß als präpariernadel, der is komplett aus edelstahl.

nochmals vielen dank für die sehr kompetenten und schnellen antworten, top forum hier!

so, heute sind die anderen beiden schalen auch kontaminiert. ich glaub langsam der print den ich benutze is verschmutzt, hab ihn vom ring. mit meinen eigenen prints hab ich wenigstens ne ergolgsquote von 60 %. aber seit 3 wochen versuch ichs mit dem print vom ring (columbian rust spore, wollt ich unbedingt haben ) und hab schon um die 20 petris angesetzt - alle kontaminiert. naja die cubis sind ja eh alle soziemlich gleich

wenn man mit verunreinigten prints arbeitet, bildet sich die konti dann meist an der stelle wo die sporen aufgebracht wurden oder kann es sich auch überall ausbreiten?

Der Beitrag wurde bearbeitet von Knospe am Jan 4 2013, 19:02 Uhr.

[hogie]

Du bringst ja eine geringe (!) Menge an Sporenflüssigkeit auf den Nährboden auf. Wenn deine Sporenflüssigkeit schon kontaminiert ist, dann wächst die Hefe auch zuerst sauber genau dort, wo du die Flüssigkeit aufbringst. Man bringt möglichst wenig auf, dass nichts in der Schale herum läuft. Du kannst es auch mit einem großen Zickzack über die Petrifläche auftragen. Der Boden ist so fest, dass darin nichts wandern kann (deshalb sind Flüssigmedien Mist, weil sich Kontaminanten überall verteilen). Wenn du auf der Schale nur eine kleine saubere Stelle hast, kannst du die auf neue Petris übertragen. So lange bis du eine saubere Kultur hast. Ein mit Hefe kontaminierter Print ist sehr lästig, weil Hefen schneller wachsen als dein Mycel.

Wenn du dein Impfmaterial ganz dünn im Zickzack aufträgst und die Hefe genau so wächst, dann kannst du sicher sein, dass dein Impfmaterial übel kontaminiert ist.

[Knospe]

ich kratz einfach immer ne gerade sichtbare menge sporen vom abdruck ab und stich mit der präpariernadel in die mitte vom agar. eigentlich breitet sich die konti sowieso nie von der einstichstelle aus. entweder vom rand oder über die ganze fläche verteilt.

ich muss jetzt mal n paar tests machen und dann guck ich weiter. d.h. ne improvisierte präpariernadel ganz aus stahl die im ddkt sterilisiert wird, die glovebox werd ich umbauen um sie so luftdicht wie nur iwie möglich zu bekommen und ich klone ein paar frische pilze.

ich teil mich dann mit wenn ich mehr weiß

thx

[Kosmos]

Ohne dass ich jetzt wirklich viel Ahnung von der Materie habe - kann es sein, dass die Petris selbst das Problem sind?
Lese hier schon eine Weile mit, weil mich das Thema auch interessiert und ich vielleicht dieses Jahr mal selber anfangen möchte, Pilze zu züchten^^

[hogie]

ich kratz einfach immer ne gerade sichtbare menge sporen vom abdruck ab und stich mit der präpariernadel in die mitte vom agar. eigentlich breitet sich die konti sowieso nie von der einstichstelle aus. entweder vom rand oder über die ganze fläche verteilt.

Wie verschließt du die Petris nach dem Beimpfen?
Mit Frischhaltefolie, Parafilm ö.ä ?

[Knospe]

ne doppelschicht frischhaltefolie mach ich drüber.

vermute eher es lag an der glovebox. is ne ikea-kiste und der deckel (den ich als boden verwende) hat nich richtig abgedichtet. da der deckel ne wölbung nach innen hat wurde jedes mal wenn ich was hingestellt oder aufgehoben hab luft von draußen reingesogen. hab das jetzt mit ner dicken fuge acryl abgedichtet. dann n fenster an der seite reingesägt und dieses mit ner plastikfolie von so nem dünnen abhefter und panzertape verklebt. muss ich halt jedes mal wieder abziehen und neu verkleben aber was besseres is mir auf die schnelle nich eingefallen
auf jeden fall is die box jetzt absolut luftdicht!

außerdem ne andere "präpariernadel" (eher ein schaschlikspieß ) aus stahl benutzt. wurde vorher im ddkt sterilisiert. ich hoffe 10 minuten haben gereicht..

heute wurden 5 klone und 5 schalen mit a+ sporen (aus eigener herstellung ) angesetzt. die schalen bekamen noch ne doppelschicht frischhaltefolie verpasst und werden nun bei zimmertemperatur gelagert. ich sag dann bescheid wies aussieht.

Der Beitrag wurde bearbeitet von Knospe am Jan 7 2013, 15:17 Uhr.

[Knospe]

also mein kontiproblem hat sich gelöst

wie gesagt, die box is nun komplett luftdicht und ich hab insgesamt nochmal 2 stufen penibler gearbeitet. außerdem hab ich viel mehr sagrotan med verwendet. hab die luft buchstäblich "gewaschen", wenn da nich alles stirbt drin
is zwar unschön in so ner "pfütze" zu arbeiten aber es funzt...^^ übertreib ichs vllt...? um die 10 sprüher lass ich in ne ca. 60 x 30 x 30 cm box.

20 schalen angesetzt und alle sauber!

Der Beitrag wurde bearbeitet von Knospe am Jan 20 2013, 17:10 Uhr.

[WerBert]

[hogie]

is zwar unschön in so ner "pfütze" zu arbeiten aber es funzt...^^ übertreib ichs vllt...? um die 10 sprüher lass ich in ne ca. 60 x 30 x 30 cm box.

Das ist so gut wie gar nichts, wenn du damit Luft desinfizieren willst. Das Desinfektionsmittel erreicht Bakterien und Sporen in der Luft ja praktisch gar nicht. Feinste Partikel, die in der Luft schweben, werden erst durch den Flüssigkeitsnebel zu Boden gerissen (rein mechanisch). Für diesen Effekt würde sogar steriles Wasser reichen, dazu brauchst du noch kein Desinfektionsmittel. In die Pfütze gerissen, ist das Zeug erst mal gebunden, braucht aber Minuten, bis es tot ist. Erst dort wirkt das Desinfektionsmittel.

Vorsicht, wenn du mit Alkoholpfützen und Feuer arbeitest (um das Impfbesteck auszuglühen)! Ich stelle immer ein Eimer Wasser bereit. Sollten plötzlich deine Handschuhe in Flammen stehen, weißt du in Sekundenschnelle, was zu tun ist. Eine Sekunde kann darüber entscheiden, ob du schwere Verbrennungen davon trägst oder mit dem Schrecken davon kommst.

[Knospe]

ich hab mich schonmal sehr schlimm verbrannt (3 wochen Kh.), deshalb trau ich mich das garnich nen brenner in die box zu stellen.. ich flamm das besteck außerhalb der box ab, stells rein und dann wird mit sag. med gesprüht...

dachte allerdings dass die alk.-dämpfe etwas zur desinfektion beitragen^^
also wenn ich die box richtig ordentlich mit nem feinen wasserzerstäuber aussprühe müsst ich fast den gleichen effekt wie mim sagrotan haben? weil 8 euro für so ne flasche is jetzt auch nich gerade billig!

oder überseh ich jetzt nen großen nachteil ? *dummfrag*

[hogie]

ich hab mich schonmal sehr schlimm verbrannt (3 wochen Kh.), deshalb trau ich mich das garnich nen brenner in die box zu stellen.. ich flamm das besteck außerhalb der box ab, stells rein und dann wird mit sag. med gesprüht...

gebrannte Kinder
Man kann aber gar nicht vorsichtig genug sein. Auch mit Brenner draußen. Bei mir sind die auch Handschuhe fast permanent triefend nass vor Alkohol, weil man immer wieder unsteriles Zeug anfassen muss.

dachte allerdings dass die alk.-dämpfe etwas zur desinfektion beitragen^^

Die Alkoholdäpfe sind wirkungslos. Braucht man professionell Gase zur Desinfektion, nimmt man Ethylenoxid oder Formaldehyd.

also wenn ich die box richtig ordentlich mit nem feinen wasserzerstäuber aussprühe müsst ich fast den gleichen effekt wie mim sagrotan haben? weil 8 euro für so ne flasche is jetzt auch nich gerade billig!

Bezüglich des Luftraums würde Nebel mit sterilem Wasser schon viel bringen, du willst ja aber auch die Oberflächen der Box möglichst steril bekommen. Wofür man medizinische Desinfektionsmittel braucht, ist mir allerdings ein Rätsel.

Ich verwende einfach 70% Isopropanol. Du kannst sogar einfachen Brennspiritus mit destilliertem Wasser auf 70% herunter verdünnen. Der ist genauso wirksam, stinkt bloß unangenehm. Am besten noch etwas mit synthetischer Essigsäure (kein Weinessig) ansäuern.

[WoIstDieZeit]

Weils gerade zum Thema passt - was sagt ihr zu Hepa-Filtern. Lohnt sich die Anschaffung? Die Leute von Shroomery fahren irgemdwie total darauf ab.. Für die Arbeit ist es etwas angenehmer, wie ich denke, und die Anschaffung sollte auch im Rahmen des Möglichen liegen.

[hogie]

Hepa-Technik ist schon genial, aber kein Garant für saubere Ergebnisse. Man sollte ziemlich viel über die Technik wissen und sich bei jedem Handgriff bewusst sein, was exakt passiert. Der Eigenbau eines guten Hepa-Systems ist alles andere als trivial, aber durchaus möglich. Ordentliche Hepa-Filter sind nicht billig (Hausnummer 100 Euro) und können durch einen kleinen Fehler binnen Minuten zerstört werden. Gerade sporadischer Gebrauch erfordert einiges an Wissen. Denn wenn der Hepa selbst zur Kontischleuder geworden ist, dann wird die Arbeit schnell mehr als frustrierend.

[Knospe]

ok dann hol ich mir den 70 %igen isopro.alk. wenns sagrotan med leer is. hast mich aber gerade falsch verstanden, ich flamm die präpariernadel ab und stell sie in die glovebox. die handschuhe der box sind fest verklebt und das fenster wo ich die sachen raus und rein tu is auch mit ner folie und panzertape abgeklebt. wenn ich also mal die box ausgesprüht und angefangen hab zu arbeiten is die sozusagen dicht, bekomm die nadel da garnich so schnell raus und sie wird für den kompletten arbeitsvorgang nur einmal abgeflammt. mehr als 5 schalen setz ich aber dadurch nie an und ganz zufrieden bin ich mit der lösung selber nicht... kann so pro arbeitsvorgang nur mit einerm strain arbeiten

für verbesserungsvorschläge wär ich dankbar
e.: ok, mehrere präpariernadeln vllt.. xD

Der Beitrag wurde bearbeitet von Knospe am Jan 20 2013, 19:27 Uhr.

[hogie]

Das Impfbesteck musst du nach jedem Beimpfen erneut ausglühen, sonst ist es kein Wunder, wenn du entweder 0% oder 100% Kontirate hast. Ich halte die Gloveboxen für Schrott. Eine viel primitivere, vorne halb offene Box, scheint mir deutlich bessere Ergebnisse zu bringen. Auch wenn der Innenraum nicht so perfekt ist. Du kannst darin sehr viel schneller arbeiten, was den Nachteil wieder deutlich wett macht.